文章摘要
王乐乐,喻晓蔚,徐岩.华根霉(Rhizopus chinensis)前导肽脂肪酶基因的克隆及其在Pichia pastoris中的表达[J].高技术通讯(中文),2009,19(1):105~
华根霉(Rhizopus chinensis)前导肽脂肪酶基因的克隆及其在Pichia pastoris中的表达
  修订日期:2007-09-20
DOI:
中文关键词: 华根霉, 脂肪酶, 克隆, 表达, 毕赤酵母
英文关键词: 
基金项目:
作者单位
王乐乐 江南大学教育部工业生物技术重点实验室无锡 
喻晓蔚 江南大学教育部工业生物技术重点实验室无锡 
徐岩 江南大学教育部工业生物技术重点实验室无锡 
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中文摘要:
      通过3次PCR程序克隆得到了华根霉(Rhizopus chinensis CCTCCM201021)脂肪酶全基因序列,该基因的开放阅读框长1170bp,不含内含子,编码一个389个氨基酸残基的蛋白质,包括26个氨基酸的信号肽,94个氨基酸的前导序列和269个氨基酸的成熟肽,其推断的氨基酸序列与一些已报道的根霉脂肪酶序列同源性为86%。在巴斯德毕赤酵母(Pichia pastoris)GS115中分泌表达前导肽序列。SDS PAGE分析表明表达蛋白的分子量约37kD。N 端氨基酸序列分析表明该重组蛋白分泌过程中前导序列N 端的67个氨基酸被切割掉,表达的重组脂肪酶由前导序列C 端的27个氨基酸和成熟肽的269个氨基酸组成。发酵132h后上清中重组脂肪酶的表达量最高,蛋白含量约54mg/mL,橄榄油乳化法测水解酶活为161U/mL,其比活比野生型华根霉脂肪酶高约43倍。
英文摘要:
      
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